カートに追加しました

比較表に追加しました

ブランティングコンビニエンスキット Blunting-Convenience Kit

製造元 :
(株)ニッポンジーン
保存条件 :
冷凍 (ドライアイス輸送)
  • 構造式
  • ラベル
  • 荷姿
比較
製品コード
容量
価格
在庫
販売元
318-06293
製造元
318-06293
JAN
4987481586048
5回用
販売終了
販売元
312-06291
製造元
312-06291
JAN
4987481585294
25回用
希望納入価格
20,000 円

ドキュメント

スペクトルデータ
検査成績書
校正証明書

製品概要

Blunting-Convenience Kit はDNA 末端の平滑化とライゲーション反応を簡単、迅速に行うことができるキットです。T4 DNA Polymerase はPolymerase 活性と3′→ 5′Exonuclease 活性を持ち、DNA 末端を効率よく平滑化することができます。また、ライゲーション試薬の2 x Ligation Mix はLigation-Convenience Kit と同じものであり、平滑末端ライゲーション反応も16°C、5 ~ 30 分間で効率よく行うことができます。

特長

  • 短時間(37°C、5 分間)で高効率なDNA 平滑化が可能(DNA末端形状かかわらず)
  • 短時間(16°C、5~30 分間)で高効率な平滑末端ライゲーションが可能
  • ライゲーション反応終了液をそのまま形質転換に使用可能
  • 平滑化反応、ライゲーション反応共に、標準反応スケールは20 µl

融解方法の注意

  • 失活を避けるため、T4 DNA Polymerase は絶対にボルテックスしないでください。
  • 2 x Ligation Mix は、使用時に氷上にて完全に融解させ、ピペッティングでよく混ぜてから使用して下さい。
  • 2 x Ligation Mix は、50 回までの凍結融解による反応効率の低下は認められておりません。

使用例

プロトコール

(1) 平滑化反応液の調製
5’突出末端、3’突出末端及びPCR 産物など、末端を平滑化したいDNA(DNA 末端濃度で0.1~10 pmol)を17 µlに調製する。次に、10 x Blunting Buffer を2 µl 加え混合する。

平滑化反応(37℃、5~30分間)

DNA サンプル 17 μl
10×Blunting Buffer 2 μl
T4 DNA Polymerase 1 μl
Total 20 μl

(2) 酵素の添加
T4 DNA Polymerase を1 µl 加え、ピペッティングで混合する。

(3) 平滑化反応
37°Cで5 分間反応させる。

(4) 反応の停止
平滑化反応液を氷中に置き反応を停止する。すぐに使用しない場合はフェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール抽出、エタノール沈澱を行い-20°Cで保存する。

(5) ライゲーション反応液の調製
平滑化反応液、平滑末端DNA ベクター溶液を合わせて10 µl のDNA 溶液を調製する。10 µl の2 x Ligation Mix を添加し、混和する。

ライゲーション反応(16℃、5~30分間)

平滑化DNAサンプル 10 μl
2×Ligation Mix 10 μl
Total 20 μl

(6) ライゲーション反応
16°Cで5~30 分間反応させる。

(7) 形質転換
反応液をそのまま形質転換に用いる。

実験例1 ベクター平滑化の有無による形質転換効率の比較

EcoR l (5′末端突出)とPst l (3′末端突出)でDouble digestion したpUC19 DNA について、本キットを用いて平滑化(37°C、5 分間)、ライゲーション(16°C、30 分間)を行い、大腸菌の形質転換を行った。未切断のpUC19 DNA によって得られる形質転換効率を1として、平滑化あり、なしの場合の形質転換効率を相対値でグラフに示した。

結果

本キットによって、制限酵素処理されたpUC19 DNA が平滑化され、さらに平滑末端ライゲーションされたことが確認できた。

※その他にも「インサートDNAの平滑化」や、参考データとして「PCR産物の平滑化」のデータを公開しています。詳しくは製品マニュアルをご覧ください。

概要・使用例

概要 Blunting-Convenience Kit はDNA 末端の平滑化とライゲーション反応を迅速・簡単に行うことができるキットです。キットに採用しているT4 DNA Polymerase は、5'→3'Polymerase 活性と3'→5'Exonuclease 活性を持つため、DNA 末端を効率よく平滑化することができます。また、ライゲーション反応では「Ligation-Convenience Kit 」と同じ2 ×LigationMix を使用しておりますので、ライゲーション反応は5 ~30 分間で完了します。【特 長】●平滑化からライゲーションまでを簡便化。●5'突出末端、3'突出末端での条件検討が不要。●短時間で高効率(最短10 分間)。 平滑化反応5 分間 ライゲーション反応5 ~30 分間●反応終了液はそのまま形質転換に使用可能。●低コスト。
WAKO BIO WINDOW No.68,p17(2005.JUN.)。

物性情報

「物性情報」は参考情報でございます。規格値を除き、この製品の性能を保証するものではございません。
本製品の品質及び性能については、本品の製品規格書をご確認ください。
なお目的のご研究に対しましては、予備検討を行う事をお勧めします。

製造元情報

別名一覧

  • 掲載内容は本記事掲載時点の情報です。仕様変更などにより製品内容と実際のイメージが異なる場合があります。
  • 製品規格・包装規格の改訂が行われた場合、画像と実際の製品の仕様が異なる場合があります。
  • 掲載されている製品について
    【試薬】
    試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
    試験研究用以外にご使用された場合、いかなる保証も致しかねます。試験研究用以外の用途や原料にご使用希望の場合、弊社営業部門にお問合せください。
    【医薬品原料】
    製造専用医薬品及び医薬品添加物などを医薬品等の製造原料として製造業者向けに販売しています。製造専用医薬品(製品名に製造専用の表示があるもの)のご購入には、確認書が必要です。
  • 表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
  • 表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。