レビス® LH-ラット(Sタイプ) LBIS Rat LH ELISA Kit (S-type)

LHは下垂体前葉 (腺下垂体) の好塩基性性腺刺激ホルモン産生細胞 (ゴナドトローフ) でFSHと共に産生、貯蔵され、視床下部ホルモンLHRHの刺激で分泌されます。精巣にもLH様の物質が存在するという報告があります。動物種における分布は魚類－哺乳類の全脊椎動物に及びます。ラット下垂体でのLHの含量は、雄では6～7 μg/gland、雌では3～4 μg/gland (NIH-LH1 S1 換算) とオスのほうが多く、雌では性周期に伴い変動します。

LHは分子量：約 29 000 の糖蛋白質で、TSH、FSHと共通のα－サブユニットと、LH特有のβ－サブユニットからなるヘテロダイマーです。LHの標的器官は、雌では卵胞の成熟顆粒膜細胞で、FSHと協力して卵胞の成熟とエストロゲン産生、排卵を誘発し、排卵後黄体化した後はプロゲステロン産生分泌を促進します。雄では精巣の間質細胞 (Leydig 細胞) でアンドロゲン産生分泌促進、アンドロゲンを介し2次的に精子形成促進に関与します。受容体は膜7回貫通－G蛋白共役型PKA系です。

従ってLHが不足すると性ステロイド分泌低下、間質細胞萎縮、排卵黄体化停止などが起こり、過剰状態では精巣間質細胞肥大とそれに続く萎縮、エストロゲン、アンドロゲンの分泌増大、早発過排、性成熟促進等が起こります。LHの分泌はGnRH (LHRH)によって直接的に促進され、生理状態としては血中性ステロイドの低下 (間接、直接)、性周期による変動 (特に排卵前期)、更年期－閉経後に分泌は増大します。

男性でも加齢によって増加します。発情前期に大量に分泌されるエストロゲンは、ポジティブフィードバックによりLHRHを介してLHの一過性大量分泌 (LHサージ) を引き起こし、排卵を誘起します。LHの分泌は血中性ステロイドの増加 (間接、直接)、オピオイドペプチド特にβ－エンドルフィン、幼小児期、妊娠時、産褥期などで抑制されます。

特長

• 短時間 (全反応時間：3時間50分) で測定可能
• 微量な検体 (標準操作法は 10 μL) で測定可能
• 環境に優しい防腐剤を使用
• 全ての試薬が溶液タイプで即座に使用可能
• 高い測定精度と再現性

製品情報

検体

ラット血清・血漿

標準曲線範囲

0.313～10 ng/mL

• 操作法

  抗体固相化96ウェルプレート
  ↓
  洗浄4回
  ↓
  希釈検体または標準溶液	50 µL
  ↓
  攪拌、室温、2時間静置反応
  ↓
  洗浄4回
  ↓
  ビオチン結合抗LH抗体	50 µL
  ↓
  攪拌、室温、1時間静置反応
  ↓
  洗浄4回
  ↓
  ペルオキシダーゼ・アビジン結合物	50 µL
  ↓
  攪拌、室温、30分間静置反応
  ↓
  洗浄4回
  ↓
  発色液(TMB)	50 µL
  ↓
  攪拌、室温、20 分間静置反応
  ↓
  反応停止液(1M H2SO4)	50 µL
  ↓
  攪拌
  ↓
  吸光度測定(主波長450 nm、副波長620 nm)

  室温：20～25 ℃

• 標準曲線(例)

  

• 精度試験 (アッセイ内変動)

  検体	A	B
  1	8.74	1.15
  2	8.78	1.03
  3	8.79	1.07
  4	8.68	1.06
  5	8.03	1.03
  6	8.27	1.13
  7	7.94	1.07
  8	7.97	1.07
  mean	8.40	1.07
  SD	0.39	0.04
  CV(%)	4.6	3.9

  単位：ng/mL, n=8

• 再現性試験 (アッセイ間変動)

  測定日/検体	E	F	G
  0日目	5.01	1.25	0.238
  1日目	5.01	1.24	0.239
  2日目	5.00	1.27	0.347
  3日目	5.00	1.28	0.337
  mean	5.00	1.26	0.335
  SD	0.0019	0.016	0.0088
  CV(%)	0.038	1.3	2.6

  単位：ng/mL, n=4

添加回収試験

• 検体C

  添加量	実測値	回収量	回収率(%)
  0.00	1.29	－	－
  0.584	1.89	0.601	103
  1.17	2.48	1.19	102
  1.75	3.01	1.73	98.5

  単位：ng/mL, n=2

• 検体D

  添加量	実測値	回収量	回収率(%)
  0.00	2.23	－	－
  1.36	3.59	1.35	100
  3.39	5.60	3.36	99.2
  4.07	6.21	3.97	97.7

  単位：pg/mL, n=2

ラット検体LH測定結果

• CD(SD), 8週齢, メス

  Sample ID	LH測定値
  1	2.81
  2	3.24
  3	4.33
  4	0.998
  5	1.21
  6	0.925
  7	1.21
  8	1.12
  9	1.53
  mean	1.93
  SD	1.22

  単位：ng/mL, 2重測定
  検体：血清
  採血時の絶食：無し
  麻酔：バルビツール系

• CD(SD), 7週齢, オス

  Sample ID	LH測定値
  1	1.72
  2	1.17
  3	2.05
  4	1.72
  5	4.31
  mean	2.19
  SD	1.22

  単位：ng/mL, 2重測定
  検体：血清
  採血時の絶食：あり
  麻酔：イソフルラン吸入麻酔